BMCP1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422996-ACT

Slc25a14 codifica la proteina trasportatrice mitocondriale BMCP1, un trasportatore della membrana interna coinvolto nella regolazione della bioenergetica mitocondriale tramite la modulazione della perdita di protoni e dell’efficienza di accoppiamento. Influenzando il potenziale di membrana, l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno (ROS) e la resa della fosforilazione ossidativa, BMCP1 collega il metabolismo mitocondriale alle risposte cellulari allo stress e alle vie di rilevamento dell’energia. Un’attività alterata di BMCP1 è stata associata a cambiamenti dell’omeostasi metabolica, alla suscettibilità allo stress ossidativo e a disfunzioni mitocondriali tessuto-specifiche, rendendo Slc25a14 un bersaglio rilevante per lo studio dei meccanismi legati al metabolismo e alla neurodegenerazione in modelli murini.

BMCP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Slc25a14 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BMCP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Slc25a14 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Slc25a14, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BMCP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Slc25a14 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BMCP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BMCP1 nelle cellule tumorali con espressione di Slc25a14 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.