BMAL1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419206-ACT

ArntlはBMAL1をコードしており、BMAL1は基本ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）-PAS型の中核転写因子として、CLOCKとヘテロ二量体を形成し、マウス組織における概日時計遺伝子発現プログラムを駆動します。BMAL1は、代謝、細胞周期制御、DNA損傷応答、免疫シグナル伝達に関与する時計制御遺伝子のリズミックな転写を調節し、環境からの手掛かりを細胞生理と統合します。PERおよびCRYタンパク質を介する転写フィードバックループの調節を通じて、BMAL1はミトコンドリア機能、酸化ストレス応答、内分泌恒常性にも影響を及ぼします。BMAL1活性の異常は、概日リズムの破綻やそれに関連する表現型と関連づけられており、代謝機能障害、炎症、腫瘍生物学のモデルで観察されています。これらの知見は、BMAL1が機序解明研究に有用であることを支持します。

BMAL1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Arntlの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BMAL1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Arntl 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はArntl転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BMAL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のArntl遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBMAL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびArntl発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBMAL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。