BID Double Nickaseプラスミド (h): sc-400510-NIC

BIDは、BCL-2ファミリーに属するアポトーシス促進性のBH3-onlyタンパク質をコードしており、外因性のデスレセプターシグナルとミトコンドリア（内因性）アポトーシス経路を結び付ける重要なリンカーとして機能します。カスパーゼ8によって切断され、短縮型BID（tBID）となった後、BAX/BAKの活性化、ミトコンドリア外膜透過性亢進、シトクロムcの放出、ならびに下流のカスパーゼカスケードの作動を促進します。BIDの活性は、ストレス応答や免疫シグナルを細胞運命の決定に統合し、DNA損傷応答や炎症性シグナル伝達などの過程とも交差します。BID依存的アポトーシスの破綻は、がん細胞の生存、神経変性、免疫介在性の組織障害に関与するとされており、アポトーシスおよびミトコンドリアシグナル研究における機序解明の要所として頻繁に用いられています。

BID ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BID 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BID内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BIDの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BIDが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。