Bex4 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-436560-LAC

Mouse brain expressed X-linked 4 (Bex4) codifica una piccola proteina arricchita nei neuroni, implicata nella regolazione della differenziazione neuronale, della crescita dei neuriti e dei programmi trascrizionali durante lo sviluppo del SNC. I membri della famiglia BEX sono stati collegati alla segnalazione responsiva alle neurotrofine e a reti di interazioni proteina–proteina che influenzano la sopravvivenza cellulare, le risposte allo stress e il controllo epigenetico dell’espressione genica. Nel sistema nervoso, Bex4 viene studiato nel contesto della specificazione di linea e della plasticità dipendente dall’attività, in cui pattern di espressione alterati possono riflettere cambiamenti nello stato di sviluppo o stress cellulare. Queste proprietà rendono Bex4 un bersaglio utile per analizzare le vie alla base di fenotipi neuroevolutivi e della vulnerabilità neuronale in modelli rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale Bex4 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Bex4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Bex4 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Bex4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Bex4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Bex4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.