beta Synuclein CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400894-ACT

ヒトのSNCBは、シナプス前部に局在する細胞質タンパク質であるβシヌクレインをコードしており、神経細胞におけるシナプス小胞ダイナミクス、神経伝達物質放出、ならびに膜関連タンパク質の輸送を調節します。シヌクレインファミリーの一員として、タンパク質―脂質相互作用に関与し、シナプスにおける凝集、分解・更新、ストレス応答を制御するプロテオスタシス経路に影響を与えます。シヌクレイン生物学の変化は神経変性過程と密接に関連しており、SNCBはαシヌクレインとの相互作用、シナプスのレジリエンスへの影響、神経細胞の脆弱性への寄与といった観点から研究されています。研究では一般に、SNCBを用いてシナプス機能や神経分化の機構、ならびにパーキンソン病および関連するシヌクレイノパチーに関与する経路を解析します。

beta Synuclein CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SNCBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

beta Synuclein CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SNCB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSNCB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性beta Synucleinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSNCB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるbeta Synuclein依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSNCB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるbeta Synuclein経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。