beta Arrestin 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400642-NIC

ARRB1 codifica la beta-arrestina 1, un adattatore multifunzionale che si lega ai GPCR attivati per mediare la desensibilizzazione, l’internalizzazione e il traffico recettoriale. Oltre alla regolazione canonica dei GPCR, la beta-arrestina 1 funge da piattaforma (scaffold) per moduli di segnalazione che includono MAPK/ERK, chinasi della famiglia SRC e componenti della macchina endocitica, modulando ampiezza e durata del segnale. Influenza inoltre programmi trascrizionali attraverso interazioni che collegano recettori prossimali alla membrana a risposte nucleari, con effetti a valle su proliferazione, migrazione e segnalazione infiammatoria. Una segnalazione dipendente da ARRB1 deregolata è stata implicata in contesti quali la biologia del cancro, le risposte allo stress cardiometabolico e i processi immunomediati, rendendolo un nodo utile per l’analisi delle vie di segnalazione.

beta Arrestin 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARRB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARRB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARRB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARRB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.