beta Arrestin 1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400642-NIC

ARRB1はβアレスチン1をコードしており、活性化されたGPCRに結合して受容体の脱感作、内在化、トラフィッキングを仲介する多機能アダプターです。GPCRの古典的な制御にとどまらず、βアレスチン1はMAPK/ERK、SRCファミリーキナーゼ、ならびにエンドサイトーシス機構の構成要素などのシグナル伝達モジュールを足場（スキャフォールド）として集約し、シグナルの強度と持続時間を形作ります。また、膜近傍の受容体から核内応答へとつながる相互作用を介して転写プログラムにも影響し、その下流で増殖、遊走、炎症性シグナル伝達に作用します。ARRB1依存的シグナルの異常は、がん生物学、心血管・代謝ストレス応答、免疫介在性プロセスなどの文脈で関与が示唆されており、経路解析のための有用な結節点（ノード）となります。

beta Arrestin 1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ARRB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ARRB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ARRB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ARRB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。