beta Arrestin 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400642-ACT

ARRB1 codifica la beta-arrestina 1, un adattatore multifunzionale che regola la desensibilizzazione dei recettori accoppiati a proteine G (GPCR), l’internalizzazione del recettore e il traffico intracellulare in seguito alla stimolazione da parte di un agonista. Oltre a terminare la segnalazione mediata dalle proteine G, la beta-arrestina 1 funge da impalcatura per complessi di segnalazione che modulano gli output delle vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e NF-κB, plasmando risposte trascrizionali dipendenti dal contesto e la dinamica del citoscheletro. Attraverso questi ruoli, ARRB1 influenza processi quali chemiotassi, endocitosi e integrazione dei segnali a valle di recettori diversi. Una segnalazione mediata dalle arrestine deregolata è stata associata ad alterazioni degli stati di segnalazione proliferativi e infiammatori implicati nella biologia del cancro, nella regolazione cardiometabolica e in circuiti GPCR rilevanti per la neuropsichiatria.

beta Arrestin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ARRB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

beta Arrestin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ARRB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ARRB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di beta Arrestin 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ARRB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da beta Arrestin 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via beta Arrestin 1 nelle cellule tumorali con espressione di ARRB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.