beta Arrestin 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400642-ACT

ARRB1 kodiert β‑Arrestin 1, einen multifunktionalen Adapter, der die Desensibilisierung G‑Protein‑gekoppelter Rezeptoren (GPCR), die Internalisierung von Rezeptoren und deren Trafficking nach Agonistenstimulation reguliert. Über die Beendigung der G‑Protein‑Signalübertragung hinaus fungiert β‑Arrestin 1 als Gerüstprotein für Signalkomplexe, die die Output-Signale der MAPK/ERK-, PI3K–AKT- und NF‑κB‑Signalwege modulieren und dadurch kontextabhängige transkriptionelle Antworten sowie die Zytoskelettdynamik prägen. Durch diese Funktionen beeinflusst ARRB1 Prozesse wie Chemotaxis, Endozytose und die Signalintegration downstream verschiedener Rezeptoren. Eine Fehlregulation arrestinvermittelter Signalgebung wurde mit veränderten proliferativen und inflammatorischen Signalzuständen in Verbindung gebracht, die in der Krebsbiologie, der kardiometabolischen Regulation sowie in für neuropsychiatrische GPCR‑Schaltkreise relevanten Kontexten eine Rolle spielen.

beta Arrestin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ARRB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

beta Arrestin 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ARRB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ARRB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen beta Arrestin 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ARRB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von beta Arrestin 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des beta Arrestin 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ARRB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.