beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419239-ACT

Atp1b3は、Na⁺/K⁺-ATPaseのβ3サブユニットをコードしている。Na⁺/K⁺-ATPaseはヘテロ多量体からなるP型ATPaseで、膜を介したNa⁺およびK⁺の濃度勾配を維持し、静止膜電位、浸透圧バランス、二次性能動輸送に不可欠である。イオン恒常性を支えることで、ATP1B3は細胞容積の調節、上皮輸送、興奮性といった過程に影響を及ぼし、膜電位やイオン依存性キナーゼ活性に連動したシグナル伝達ネットワークを調節しうる。さらにβサブユニットは、ポンプ複合体の適切な組み立て、細胞内輸送、膜での安定性にも寄与し、ATP依存的なイオン輸送を介して細胞のエネルギー需要の形成にも関わる。Na⁺/K⁺-ATPase機能の破綻は、神経機能障害、心血管・腎生理、炎症関連表現型のモデルと関連しており、Atp1b3はマウス系での機序研究に有用なターゲットとなる。

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Atp1b3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Atp1b3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAtp1b3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAtp1b3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるbeta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAtp1b3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるbeta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。