BDNF Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419319-ACT

O gene Bdnf de camundongo codifica o fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), uma neurotrofina secretada que se liga a TRKB/NTRK2 e ao p75NTR para regular a sobrevivência neuronal, a diferenciação, a plasticidade sináptica e a remodelação de circuitos dependente da atividade. A sinalização de BDNF ativa as vias MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ para modular programas transcricionais, a dinâmica das espinhas dendríticas e a liberação de neurotransmissores. No sistema nervoso central, o BDNF é fundamental para os processos de aprendizagem e memória e contribui para a plasticidade dependente da experiência. Alterações na expressão ou na sinalização de Bdnf têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos e são amplamente estudadas em modelos de neurodegeneração, responsividade ao estresse e regulação metabólica.

BDNF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Bdnf sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BDNF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Bdnf em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Bdnf, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BDNF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Bdnf nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BDNF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BDNF em células tumorais com expressão de Bdnf silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.