Bcr Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401514-ACT

O BCR humano codifica a proteína Bcr, um regulador citoplasmático multifuncional com atividade de quinase de serina/treonina e um domínio RhoGEF que modula a sinalização de pequenas GTPases. Por meio de efeitos sobre a dinâmica do citoesqueleto dependente de RAC1/CDC42, o tráfego de membrana e a sinalização responsiva ao estresse, a Bcr contribui para o controle da adesão, migração e proliferação celulares. O BCR é amplamente estudado na biologia das neoplasias hematológicas devido ao seu envolvimento em eventos oncogênicos de fusão gênica e na reprogramação da sinalização a jusante. Alterações na expressão ou na regulação do BCR fornecem um ponto de entrada viável para dissecar vias ligadas a quinases e GTPases relevantes para transformação e programas de sinalização específicos de linhagem.

Bcr O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BCR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Bcr O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BCR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BCR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Bcr. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BCR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Bcr no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Bcr em células tumorais com expressão de BCR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.