BCLAF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403820-ACT

BCLAF1 (fator de transcrição 1 associado à BCL2) é uma proteína nuclear que se liga a DNA/RNA e regula programas de transcrição e o processamento de mRNA, conectando o controle associado à cromatina ao splicing alternativo e à estabilidade de RNA. Ela participa de respostas ao estresse celular e de processos relacionados a dano no DNA por meio de interações com reguladores transcricionais e componentes do spliceossomo, influenciando a progressão do ciclo celular e a sinalização associada à apoptose. A expressão ou função desregulada de BCLAF1 foi relatada em múltiplos contextos tumorais e em estados relacionados ao sistema imune, nos quais alterações na regulação transcricional e pós-transcricional podem remodelar redes gênicas de proliferação, sobrevivência e inflamação. Essas propriedades fazem de BCLAF1 um nó útil para dissecar o acoplamento entre transcrição e splicing e o crosstalk entre vias em condições basais e de estresse.

BCLAF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BCLAF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BCLAF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BCLAF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BCLAF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BCLAF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BCLAF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BCLAF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BCLAF1 em células tumorais com expressão de BCLAF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.