Bcl-x_S/L CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400170-ACT

BCL2L1 は、Bcl-xS/L タンパク質アイソフォームをコードしており、BAX や BAK などの BCL2 ファミリー分子との相互作用を介してミトコンドリア外膜の透過化を調節する、ミトコンドリア依存性アポトーシスの中核的制御因子です。選択的スプライシングにより、抗アポトーシス型の Bcl-xL と、プロアポトーシス型の Bcl-xS が生じ、BCL2L1 は発生過程、免疫恒常性、ならびに細胞ストレス応答における細胞運命決定に関与します。BCL2L1 の活性は、増殖因子シグナルおよびストレス経路からの入力を統合し、カスパーゼ活性化、ミトコンドリアの完全性、さらには遺伝毒性または代謝的負荷下での生存に影響を及ぼします。BCL2L1 の発現異常やアイソフォーム比の破綻は、がん細胞の生存や治療抵抗性の機序、神経変性に関連するアポトーシス脆弱性モデルなどで頻繁に研究対象となっています。

Bcl-xS/L CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BCL2L1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Bcl-xS/L CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BCL2L1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBCL2L1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Bcl-xS/Lの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBCL2L1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBcl-xS/L依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBCL2L1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBcl-xS/L経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。