Bcl-2 Plasmídeo duplo de Nickase (m2): sc-419304-NIC-2

O gene Bcl2 de camundongo codifica a proteína Bcl-2, um regulador da apoptose intrínseca localizado nas mitocôndrias, que preserva a integridade da membrana externa mitocondrial e suprime a liberação de citocromo c e a ativação de caspases. A Bcl-2 atua na rede de interações da família BCL-2 para equilibrar sinais pró-sobrevivência e pró-apoptóticos, moldando decisões sobre o destino celular a jusante de respostas ao estresse e da privação de fatores de crescimento, ao mesmo tempo em que se integra a vias que controlam a homeostase do cálcio e a autofagia. A expressão desregulada de Bcl2 está associada à sobrevivência alterada de populações celulares imunes e neurais e tem sido amplamente implicada na transformação oncogênica e na resistência a programas de morte celular. A edição gênica de Bcl2 em camundongos apoia estudos mecanísticos de apoptose, desenvolvimento e seleção de linfócitos, sinalização de checkpoints mitocondriais e modelagem genótipo–fenótipo em contextos relevantes para doenças.

Bcl-2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m2) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Bcl2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Bcl2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Bcl2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Bcl2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.