Plasmide Double Nickase (m2) Bcl-2: sc-419304-NIC-2

Le gène murin Bcl2 code la protéine Bcl-2, un régulateur de l’apoptose intrinsèque localisé dans les mitochondries, qui préserve l’intégrité de la membrane externe mitochondriale et inhibe la libération du cytochrome c ainsi que l’activation des caspases. Bcl-2 agit au sein du réseau d’interactions de la famille BCL-2 pour équilibrer les signaux pro-survie et pro-apoptotiques, orientant les décisions de destinée cellulaire en aval des réponses au stress et du retrait des facteurs de croissance, tout en s’articulant avec des voies impliquées dans l’homéostasie du calcium et l’autophagie. Une expression dérégulée de Bcl2 est associée à une survie modifiée de populations cellulaires immunitaires et neuronales et a été largement impliquée dans la transformation oncogénique et la résistance aux programmes de mort cellulaire. L’édition du gène Bcl2 chez la souris facilite les études mécanistiques de l’apoptose, du développement et de la sélection des lymphocytes, de la signalisation des points de contrôle mitochondriaux, ainsi que la modélisation génotype–phénotype dans des contextes pertinents pour les maladies.

Bcl-2 Le plasmide double nickase (m2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Bcl2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Bcl2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Bcl2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Bcl2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.