Bcl-11a Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403612-ACT

BCL11A codifica il fattore di trascrizione Bcl-11a, una proteina con dita di zinco in grado di legare il DNA che regola la specificazione delle linee cellulari e i programmi di differenziamento, in particolare nei compartimenti ematopoietico e immunitario. Agisce nel controllo trascrizionale associato alla cromatina, integrandosi con complessi coregolatori per plasmare reti di espressione genica coinvolte nelle decisioni di destino cellulare, nella proliferazione e nella tempistica dello sviluppo. BCL11A è strettamente legato alla regolazione della globina eritroide e a un più ampio controllo epigenetico della maturazione ematopoietica, rendendolo un nodo chiave nelle vie che governano lo switching dell’emoglobina e lo sviluppo linfoide. Un’attività disregolata di BCL11A è stata associata alla biologia delle patologie ematologiche e a stati di differenziamento alterati, supportandone l’impiego come bersaglio meccanicistico negli studi di genomica funzionale.

Bcl-11a Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BCL11A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Bcl-11a Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BCL11A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BCL11A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Bcl-11a. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BCL11A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Bcl-11a nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Bcl-11a nelle cellule tumorali con espressione di BCL11A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.