BCAP CRISPR Activationプラスミド (m): sc-429913-ACT

マウスのPik3ap1はBCAP（B細胞におけるPI3Kのアダプター）をコードしており、免疫受容体シグナル伝達をホスホイノシチド3-キナーゼ（PI3K）の活性化へと連結する細胞質アダプターである。BCAPは、B細胞受容体および自然免疫受容体からの上流シグナルをPI3K–AKTシグナル伝達に結び付け、リンパ球の活性化、生存、代謝リプログラミングに影響する下流の転写プログラムを形成する。これらの役割を通じて、Pik3ap1はNF-κBやMAPK依存性応答とのクロストークを含む免疫経路間のシグナル統合を研究するために用いられている。PI3K経路の配線異常やアダプター介在性のシグナル伝播の破綻は、免疫機能障害および炎症のモデルと関連しており、免疫学およびシステムシグナル伝達における機構研究を支える。

BCAP CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Pik3ap1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BCAP CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Pik3ap1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPik3ap1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BCAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPik3ap1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBCAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPik3ap1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBCAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。