BAF53 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403200-ACT

ACTL6A codifica a BAF53A, uma subunidade relacionada à actina do complexo de remodelamento de cromatina dependente de ATP SWI/SNF (BAF), que regula o posicionamento de nucleossomos e a acessibilidade transcricional. A BAF53A dá suporte ao controle dependente de cromatina da progressão do ciclo celular, da especificação de linhagem e de programas transcricionais responsivos a danos no DNA, interagindo com fatores de transcrição e outras subunidades do BAF para coordenar a atividade de enhancers e promotores. Por meio do seu papel na regulação epigenética, ACTL6A influencia vias ligadas à proliferação e à diferenciação, incluindo a organização da cromatina e a regulação da transcrição pela RNA polimerase II. A expressão desregulada de ACTL6A e alterações na composição do complexo BAF têm sido associadas a estados transcricionais aberrantes em múltiplos contextos de câncer e a fenótipos do desenvolvimento, tornando-o um ponto útil para estudos mecanísticos do controle epigenético.

BAF53 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACTL6A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BAF53 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACTL6A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACTL6A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BAF53. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACTL6A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BAF53 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BAF53 em células tumorais com expressão de ACTL6A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.