BACH2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419284-ACT

Bach2 codifica o fator de transcrição BACH2, da família BTB/POZ e com homologia CNC, um regulador central de programas de expressão gênica que equilibram a ativação imune e a tolerância. Em camundongos, o BACH2 molda o desenvolvimento e a função de linfócitos, incluindo a maturação de células B, redes transcricionais associadas à troca de classe, e decisões de linhagem em células T, como a estabilidade de células T reguladoras e a diferenciação de células efetoras. Ele integra vias de sinalização e processos associados à cromatina para modular respostas de citocinas, vias de estresse oxidativo e checkpoints relacionados à apoptose. A desregulação da atividade de BACH2 está associada a patologias mediadas pelo sistema imune e a alterações na homeostase linfoide, o que sustenta seu uso em estudos mecanísticos de autoimunidade, inflamação e modelos de doenças hematológicas.

BACH2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Bach2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BACH2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Bach2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Bach2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BACH2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Bach2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BACH2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BACH2 em células tumorais com expressão de Bach2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.