B-ATF Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-401553-LAC-2

Il gene umano BATF codifica B-ATF, un fattore di trascrizione bZIP (basic leucine zipper) della rete AP-1 che eterodimerizza con le proteine JUN e modula il legame al DNA su elementi di tipo AP-1 e su elementi compositi AICE/IRF, contribuendo a definire programmi di espressione genica specifici del contesto. BATF è un regolatore centrale della differenziazione e della funzione effettrice delle cellule immunitarie, influenzando la specificazione delle linee T helper e T follicular helper, le risposte del centro germinativo e la segnalazione indotta da citochine a valle di vie quali l’attivazione del TCR e il controllo trascrizionale dipendente da IL-21/STAT. Un’attività deregolata di BATF e i relativi circuiti trascrizionali sono stati associati a infiammazione immunomediata, autoimmunità e stati trascrizionali oncogenici nelle neoplasie ematologiche, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla regolazione immunitaria. L’editing genico di BATF supporta applicazioni di genomica funzionale, tra cui la perturbazione della cooperatività AP-1/IRF, la mappatura dell’uso degli enhancer e del rimodellamento della cromatina, e l’analisi delle reti di segnalazione immunitaria in modelli cellulari umani ingegnerizzati.

Le particelle di attivazione lentivirale B-ATF (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BATF in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale B-ATF (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BATF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di B-ATF. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BATF e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.