Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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AWP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425748
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AWP1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico AWP1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AWP1 Antibody (B-5): sc-398513
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AWP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-425748 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Zfand6 codifica AWP1, una proteina contenente un dominio AN1-type a dita di zinco, implicata nella regolazione ubiquitina-dipendente del turnover proteico e nella segnalazione dello stress cellulare. AWP1 è stata associata alla modulazione di vie infiammatorie e dell’immunità innata, inclusa la segnalazione di NF-κB, attraverso interazioni con substrati ubiquitinati e con componenti delle reti di ligasi dell’ubiquitina. Nei sistemi murini, l’espressione e la funzione di Zfand6 vengono studiate nel contesto della proteostasi, della trasduzione del segnale e delle risposte cellulari a citochine e stress. La disregolazione del controllo mediato dall’ubiquitina e della segnalazione infiammatoria è ampiamente rilevante per i meccanismi alla base della biologia del cancro, della neurodegenerazione e delle patologie a guida immunitaria, rendendo Zfand6 un nodo utile per interrogare le vie di segnalazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AWP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Zfand6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Zfand6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Zfand6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AWP1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Zfand6 per lo studio della segnalazione di AWP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Zfand6 critici per la funzione di AWP1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Zfand6 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal AWP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AWP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Zfand6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal AWP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AWP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Zfand6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Zfand6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.