ATPIF1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419264-ACT

Il gene murino Atpif1 codifica ATPIF1, un fattore inibitore della ATP sintasi mitocondriale che si lega al settore F1 per limitare l’idrolisi dell’ATP quando la forza proton-motrice collassa. Riducendo l’attività inversa della ATP sintasi, ATPIF1 contribuisce a preservare le riserve cellulari di ATP e a sostenere l’omeostasi del potenziale di membrana mitocondriale durante lo stress metabolico. Questa regolazione collega Atpif1 alla fosforilazione ossidativa, al rimodellamento bioenergetico e all’equilibrio redox, processi spesso studiati in modelli di disfunzione cardiometabolica, stress tipo ischemico e metabolismo delle cellule tumorali. Un’alterata attività di ATPIF1 può influenzare la dinamica mitocondriale e le risposte allo stress che determinano la sopravvivenza cellulare, la proliferazione e la segnalazione infiammatoria.

ATPIF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Atpif1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ATPIF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Atpif1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Atpif1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ATPIF1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Atpif1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ATPIF1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ATPIF1 nelle cellule tumorali con espressione di Atpif1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.