ATPIF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419264-ACT

O gene Atpif1 de camundongo codifica a ATPIF1, um fator inibitório da ATP sintase mitocondrial que se liga ao setor F1 para restringir a hidrólise de ATP quando a força próton-motriz colapsa. Ao limitar a atividade reversa da ATP sintase, a ATPIF1 ajuda a preservar os estoques celulares de ATP e a manter a homeostase do potencial de membrana mitocondrial durante estresse metabólico. Essa regulação associa o Atpif1 à fosforilação oxidativa, ao remodelamento bioenergético e ao equilíbrio redox, processos frequentemente investigados em modelos de disfunção cardiometabólica, estresse do tipo isquêmico e metabolismo de células tumorais. Alterações na atividade da ATPIF1 podem influenciar a dinâmica mitocondrial e respostas ao estresse que modulam a sobrevivência celular, a proliferação e a sinalização inflamatória.

ATPIF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Atpif1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ATPIF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Atpif1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Atpif1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ATPIF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Atpif1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ATPIF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ATPIF1 em células tumorais com expressão de Atpif1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.