ATPIF1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403038-ACT

ATPIF1（ATPase inhibitory factor 1）は、ミトコンドリア膜電位が崩壊した際にF1F0-ATP合成酵素に結合してATP加水分解を抑制し、エネルギーストレス下で細胞内ATPを保持するのに寄与するミトコンドリアタンパク質をコードします。酸化的リン酸化の効率やカップリング状態を調節することで、ATPIF1はミトコンドリアの生体エネルギー、活性酸素種（ROS）バランス、呼吸と解糖の間の代謝リプログラミングに影響します。その活性は、ミトコンドリア品質管理やストレス適応シグナル伝達経路と関連し、低酸素や栄養制限下における細胞の生存・増殖を規定します。ATPIF1発現の破綻は、がん代謝におけるミトコンドリア機能変化や、心代謝疾患および神経変性疾患モデルで示唆される生体エネルギー障害との関連が報告されています。

ATPIF1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATPIF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATPIF1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATPIF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATPIF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATPIF1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATPIF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATPIF1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATPIF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATPIF1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。