ATP8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406843

概要

ATP8A1はP4-ATPase型のリン脂質フリッパーゼをコードしており、ホスファチジルセリンやホスファチジルエタノールアミンなどのアミノリン脂質を膜の両葉間で移動させることで、細胞膜の脂質非対称性を維持します。この活性を通じて、ATP8A1は膜の曲率形成、ベシクルの出芽、エンドサイトーシス輸送を支え、細胞骨格の構築や極性をもった膜動態に影響を与えます。脂質非対称性の破綻は、シグナル伝達の足場や膜依存的なプロセスを変化させうるため、ATP8A1の機能は細胞内輸送や細胞生存を制御する経路と関連づけられます。ATP8A1の発現・機能異常は、膜組成と膜輸送が細胞恒常性の重要な規定因子となる神経系および代謝系の表現型との関連で検討されています。

ATP8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるATP8A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ATP8A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ATP8A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ATP8A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ATP8A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ATP8A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ATP8A1の機能に不可欠なATP8A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ATP8A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ATP8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびATP8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ATP8A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ATP8A1 HDRプラスミド（h）および ATP8A1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはATP8A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のATP8A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。