ATP5F1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405710-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ATP5F1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ATP5F1ダブルニカースプラスミド（h）およびATP5F1ダブルニカースプラスミド（h2）は、ATP5F1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ATP5F1 抗体 (C-12): sc-514419
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ATP5F1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-405710-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATP5F1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405710-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP5F1は、ミトコンドリア内膜に存在するF1F0 ATP合成酵素（複合体V）の触媒コアをコードしており、酸化的リン酸化をATP産生へと結び付ける重要な酵素です。ATP5F1はプロトン駆動力を細胞内ATPへ変換することで、イオン恒常性の維持、各種生合成、ストレス適応などのエネルギー依存的プロセスを支えるとともに、電子伝達系の活性やミトコンドリア膜電位の制御とも統合的に関わります。ATP合成酵素機能の破綻は、ミトコンドリア機能障害、活性酸素種（ROS）処理の変化、細胞の生存や増殖に影響しうる代謝リプログラミングと関連することが示されています。生体エネルギー代謝の中核因子として、ATP5F1は神経筋疾患や神経変性表現型、ならびにがん細胞代謝におけるミトコンドリアの関与という文脈で頻繁に研究されています。
ATP5F1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATP5F1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATP5F1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATP5F1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATP5F1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。