ATP13A3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413173-ACT

ATP13A3 codifica uma ATPase do tipo P5 predominantemente localizada nas membranas endolisossomais, onde se acredita que regule a homeostase de poliaminas e cátions e dê suporte ao tráfego vesicular. Ao influenciar a função lisossomal, a dinâmica de lipídios de membrana e processos de transporte dependentes de íons, a ATP13A3 pode impactar o fluxo autófago–lisossomo, a maturação endossomal e as respostas ao estresse celular. Alterações na expressão de ATP13A3 têm sido relacionadas na literatura a fenótipos de biologia vascular e a contextos de sinalização proliferativa, tornando-a relevante para estudos de função endotelial, desintoxicação intracelular e adaptação metabólica. Sua conectividade em vias ligadas ao controle de qualidade de organelas e a mecanismos de transporte também a posiciona como um nó útil para investigar como a disfunção lisossomal contribui para estados celulares complexos associados a doenças.

ATP13A3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATP13A3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ATP13A3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATP13A3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATP13A3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ATP13A3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATP13A3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ATP13A3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ATP13A3 em células tumorais com expressão de ATP13A3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.