ATIII CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403735-ACT

SERPINC1は、肝臓由来のセリンプロテアーゼ阻害因子であるアンチトロンビンIII（ATIII）をコードしており、トロンビンや第Xa因子を含む主要な凝固酵素を中和することで止血バランスを維持します。ATIIIの活性はヘパラン硫酸および薬理学的ヘパリンによって増強されるため、SERPINC1はグリコサミノグリカン依存的な凝固カスケード制御と関連します。SERPINC1の発現や機能の変化は、トロンビン産生の制御不全やフィブリン形成の異常と結びついており、血栓性素因の機序や凝固ネットワーク制御を研究する上で重要です。細胞生物学およびシステム生物学のワークフローにおいて、SERPINC1は、プロテアーゼ—阻害因子ダイナミクス、血管内皮—肝臓間クロストーク、ならびに炎症—凝固の接点を検証するための扱いやすいノードとなります。

ATIII CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SERPINC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATIII CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SERPINC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSERPINC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATIIIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSERPINC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATIII依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSERPINC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATIII経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。