ATF4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400155-NIC

転写活性化因子4（ATF4）は、統合ストレス応答（ISR）において適応的な遺伝子発現プログラムを統括する、ストレス応答性のbZIP型転写因子である。ATF4は、PERK、GCN2、PKR、HRIの下流で起こるeIF2αのリン酸化に続いて選択的に翻訳され、グルタチオン合成、ワンカーボン代謝、プロテオスタシスに関与する標的遺伝子を介して、アミノ酸代謝、レドックス恒常性、オートファジー、アポトーシスを制御する転写ネットワークを駆動する。さらにATF4は、小胞体（ER）ストレスおよびアンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナルとも連携し、CHOP/DDIT3との協調などを通じて、タンパク質毒性ストレスや栄養ストレス下での細胞運命決定を形作る。ATF4活性の破綻は、低酸素や栄養制限下におけるがん細胞の生存、神経変性やプロテオスタシス異常疾患、ならびにストレス適応的な転写制御が変化する代謝・炎症状態への関与が示唆されている。

ATF4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATF4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATF4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATF4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATF4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。