ATF-6α Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-432646-LAC

Il fattore di trascrizione attivante 6 (ATF-6α) è un sensore transmembrana residente nel RE che, durante lo stress del reticolo endoplasmatico, viene clivato e traslocato nel nucleo, dove induce programmi trascrizionali in grado di ripristinare la proteostasi. In quanto ramo centrale della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR), ATF-6α coordina l’espressione degli chaperoni del RE, dei componenti della degradazione associata al RE (ERAD) e il rimodellamento della via secretoria, integrandosi con la segnalazione di PERK e IRE1 per regolare la sopravvivenza cellulare e l’adattamento. Nei sistemi murini, la modulazione di Atf6 viene utilizzata per studiare la funzione delle cellule secernenti, la gestione dello stress ossidativo e metabolico e il crosstalk con la segnalazione infiammatoria. Una segnalazione di ATF6 deregolata è stata collegata allo squilibrio della proteostasi osservato in modelli di neurodegenerazione, stress correlato al diabete e rimodellamento cardiaco, rendendolo un nodo rilevante per l’analisi meccanicistica delle vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale ATF-6α (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Atf6 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ATF-6α (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Atf6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ATF-6α. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Atf6 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.