Asparagine synthetase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402240-ACT

O gene humano **ASNS** codifica a asparagina sintetase, uma enzima citosólica que catalisa a conversão dependente de ATP de aspartato e glutamina em asparagina e glutamato, ligando a homeostase de aminoácidos ao metabolismo do nitrogênio. A expressão de **ASNS** é regulada por sinais de nutrientes e de estresse, incluindo as vias da resposta integrada ao estresse e da resposta a aminoácidos, e pode influenciar a capacidade de síntese proteica durante limitações metabólicas. Alterações na atividade de **ASNS** têm sido associadas à adaptação celular à privação de nutrientes e a mudanças na aptidão proliferativa. Variantes hereditárias de perda de função em **ASNS** estão ligadas à deficiência de ASNS, um distúrbio do neurodesenvolvimento caracterizado por comprometimento do desenvolvimento cerebral, destacando a importância do gene para o equilíbrio de aminoácidos no organismo.

Asparagine synthetase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ASNS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Asparagine synthetase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ASNS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ASNS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Asparagine synthetase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ASNS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Asparagine synthetase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Asparagine synthetase em células tumorais com expressão de ASNS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.