ASIC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401452-ACT

ヒトASIC1（酸感受性イオンチャネルサブユニット1）は、細胞外の酸性化に応答する、ENaC/DEGファミリーに属するプロトン作動性でナトリウム透過性のイオンチャネルをコードします。ASIC1は、膜脱分極を介した神経興奮性およびカルシウムシグナル伝達に寄与し、シナプス伝達、感覚の情報変換、活動依存的可塑性を形成します。pH変動をイオンフラックスに結び付けることで、ASIC1は虚血や炎症性の微小環境に関連する経路（興奮毒性ストレス応答や神経免疫シグナル伝達など）とも交差します。ASIC1の活性や発現の異常は、神経変性、疼痛、不安関連行動、腫瘍関連アシドーシスのモデルで検討されており、pH依存性シグナル伝達の機構研究における重要性が示されています。

ASIC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ASIC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ASIC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ASIC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はASIC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ASIC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のASIC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるASIC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびASIC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるASIC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。