ARRDC4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406413-ACT

ARRDC4（arrestin domain containing 4）は、ヒトのα-アレスチンファミリーに属するアダプター分子で、受容体やトランスポーターをエンドサイトーシス経路およびユビキチン依存性経路へ結び付けることで、膜タンパク質のトラフィッキング制御やシグナル減衰に関与するとされています。細胞のエネルギー状態や栄養ストレス応答とも関連づけられており、代謝シグナル伝達ネットワークとの相互作用を介して、グルコース代謝や脂質代謝を調節する可能性が示されています。ARRDC4の発現は代謝シグナルに応答して変動し、受容体のターンオーバーや、その下流で細胞のストレス適応を形作る転写プログラムに影響を与える可能性があります。ARRDC4の活性や発現の異常は、代謝機能障害やシグナル恒常性の破綻を伴う状況で検討されており、複雑な疾患生物学に関わる要因としても注目されています。

ARRDC4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARRDC4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARRDC4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARRDC4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARRDC4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARRDC4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARRDC4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARRDC4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARRDC4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARRDC4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。