ARID1B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402365-LAC

ARID1B codifica una subunità centrale del complesso di rimodellamento della cromatina SWI/SNF (BAF) dipendente dall’ATP, che regola il posizionamento dei nucleosomi e l’accessibilità della cromatina per controllare i programmi trascrizionali. Attraverso il rimodellamento dell’architettura di enhancer e promotori, ARID1B influenza la specificazione di linea cellulare, la progressione del ciclo cellulare e le reti di risposta al danno al DNA, integrando segnali lungo i percorsi di sviluppo e differenziamento. Un’alterazione dell’attività di ARID1B perturba la regolazione epigenetica e l’occupazione dei fattori di trascrizione, con effetti sull’identità cellulare e sul mantenimento dello stato della cromatina. La compromissione genetica o la deregolazione di ARID1B è stata collegata a fenotipi di neurosviluppo e a difetti di rimodellamento della cromatina associati al cancro, rendendolo un nodo ampiamente studiato nella ricerca incentrata su trascrizione ed epigenoma.

Le particelle di attivazione lentivirale ARID1B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ARID1B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ARID1B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ARID1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ARID1B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ARID1B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.