ARH1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-419017-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ARH1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ARH1ダブルニカースプラスミド（m）およびARH1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Adprhを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ARH1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-419017-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスのAdprhは、アルギニン残基上のモノADPリボシル化を脱離して可逆化するADPリボース受容体加水分解酵素ARH1をコードしており、タンパク質上のADPリボース修飾のターンオーバーを制御している。この翻訳後修飾を調節することで、ARH1はNAD⁺依存性シグナル伝達および、細胞ストレス応答、代謝、タンパク質機能と交差するより広範なADPリボシル化ダイナミクスに寄与する。アルギニン結合型ADPリボシル化の攪乱は、シグナル伝達ネットワークの破綻や細胞恒常性の変化と関連づけられており、AdprhはADPリボース生物学の機序研究に有用な遺伝子座である。マウスモデルでは、ARH1活性を操作することで、可逆的ADPリボシル化が組織の生理や疾患関連表現型をどのように形成するかを検証できるが、治療効果を示唆するものではない。
ARH1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Adprh 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Adprh内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Adprhの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Adprhが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。