ARD1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402395-ACT

NAA10 は、翻訳と同時に新生ポリペプチドをN末端アセチル化し、タンパク質の安定性、局在、相互作用を調節する NatA N末端アセチル基転移酵素複合体の触媒サブユニットである ARD1 をコードする。N末端アセチル化を介して、ARD1 はプロテオスタシス、細胞骨格ダイナミクス、ストレス応答性シグナル伝達に影響を及ぼし、細胞増殖と生存を制御する経路に組み込まれている。NAA10/ARD1 活性の変化は、転写プログラムの破綻や異常なタンパク質恒常性と関連づけられており、発生表現型やがんに関連する細胞挙動とのつながりが示唆されている。タンパク質アセチル化の制御因子として、ARD1 はしばしば翻訳連動型の品質管理や、タンパク質機能に対するエピジェネティクス様の制御という文脈で研究されている。

ARD1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NAA10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARD1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NAA10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNAA10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARD1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNAA10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARD1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNAA10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARD1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。