ARAP3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405365-ACT

ARAP3（CENTD3としても知られる）は、ホスホイノシチド結合性のArfGAPおよびRhoGAPをコードしており、PI3Kシグナル伝達をARF6およびRhoファミリーGTPアーゼの協調的な制御へと結び付けます。多ドメイン構造を介して、ARAP3はアクチン細胞骨格の再編成、膜輸送、インテグリン依存的接着、ならびに走化性応答を調節し、とりわけ内皮系および造血系の系譜で重要です。ARAP3の活性は、細胞移動、血管形態形成、炎症性シグナル伝達を制御する経路と接続しており、血管新生や白血球トラフィッキングの研究において意義があります。小型GTPアーゼシグナルの破綻やARAP3発現の変化は、がん細胞の浸潤や腫瘍微小環境のリモデリングと関連づけられており、機序解明のための経路解析における重要なノードとして利用される根拠となっています。

ARAP3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARAP3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARAP3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARAP3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARAP3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARAP3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARAP3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARAP3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARAP3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARAP3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。