Aquaporin 9/AQP9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401298-ACT

AQP9 codifica per aquaporina 9, un canale di membrana plasmatica della famiglia delle acquagliceroporine che facilita il trasporto bidirezionale di acqua e di piccoli soluti come glicerolo, urea e altri metaboliti neutri. Regolando il flusso di glicerolo e l’equilibrio osmotico, AQP9 influenza il metabolismo energetico cellulare, l’omeostasi redox e le risposte a segnali infiammatori, con ruoli particolarmente rilevanti riportati negli epatociti e nelle cellule della linea mieloide. Alterazioni dell’espressione di AQP9 sono state associate a disregolazione metabolica e a cambiamenti nella funzione delle cellule immunitarie, collegando questo canale a vie coinvolte nella gluconeogenesi, nella gestione dei lipidi e nell’attivazione dei leucociti. Queste caratteristiche rendono AQP9 un bersaglio utile per studiare l’accoppiamento tra trasporto di membrana e metabolismo e l’adattamento allo stress in modelli cellulari umani.

Aquaporin 9/AQP9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AQP9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Aquaporin 9/AQP9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AQP9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AQP9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Aquaporin 9/AQP9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AQP9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Aquaporin 9/AQP9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Aquaporin 9/AQP9 nelle cellule tumorali con espressione di AQP9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.