Aquaporin 1/AQP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400340

Panoramica

AQP1 codifica l’acquaporina-1, un canale tetramerico dell’acqua di membrana che consente un rapido trasporto osmotico di acqua attraverso le membrane plasmatiche e contribuisce all’omeostasi dei fluidi. In contesti endoteliali ed epiteliali, AQP1 influenza la permeabilità transcellulare all’acqua, la regolazione del volume cellulare e le dinamiche del microambiente, che si intrecciano con il trasporto ionico e il rimodellamento del citoscheletro. Alterazioni dell’espressione e della localizzazione di AQP1 sono state associate alla biologia vascolare, a processi legati all’edema e all’angiogenesi associata ai tumori, nonché a fenotipi di motilità cellulare. In quanto canale di membrana facilmente studiabile, AQP1 viene spesso utilizzata per collegare il flusso d’acqua alla funzione di barriera, alla migrazione e alle risposte allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 1/AQP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AQP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AQP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AQP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aquaporin 1/AQP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AQP1 per lo studio della segnalazione di Aquaporin 1/AQP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AQP1 critici per la funzione di Aquaporin 1/AQP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AQP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aquaporin 1/AQP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Aquaporin 1/AQP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AQP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aquaporin 1/AQP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Aquaporin 1/AQP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AQP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AQP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.