APRT CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-410689

개요

APRT(아데닌 포스포리보실전이효소, adenine phosphoribosyltransferase)는 세포질에 존재하는 포스포리보실전이효소로, 포스포리보실 피로인산(PRPP)을 이용해 아데닌을 아데노신 일인산(AMP)으로 전환하는 아데닌 구제(salvage) 반응을 촉매함으로써 뉴클레오타이드 항상성과 퓨린 대사를 유지하는 데 기여한다. 이러한 활성은 퓨린 구제 경로를 DNA/RNA 합성, 에너지 균형, 그리고 충분한 뉴클레오타이드 풀에 의존하는 복제 스트레스 반응 등 더 광범위한 세포 과정과 연결한다. APRT 기능이 변하면 퓨린 플럭스가 교란되고 de novo 퓨린 생합성에 대한 의존성이 증가할 수 있어, 대사적 보상과 뉴클레오타이드 불균형을 연구하기에 다루기 쉬운(tractable) 시스템을 제공한다. APRT 결핍은 퓨린 처리 이상 및 관련 신장 병리와 연관된 것으로 보고되어, APRT는 대사 연계 세포 표현형을 규명하는 데 유용한 모델이 된다.

APRT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 APRT 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 APRT 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 APRT의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 APRT 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 APRT 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 APRT 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• APRT 기능에 중요한 APRT 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 APRT 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• APRT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 APRT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 APRT 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  APRT HDR 플라스미드 (h) 및 APRT HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 APRT 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 APRT 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.