AP-2μ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403095-ACT

AP2M1 codifica a subunidade μ1 do complexo adaptador AP-2, um componente central da endocitose mediada por clatrina na membrana plasmática. A AP-2μ1 reconhece motivos de triagem de carga e coordena a montagem do revestimento para regular a internalização e a reciclagem de receptores, transportadores e complexos de sinalização, influenciando a homeostase de membrana e a atenuação de sinais. Por meio de seu papel no tráfego vesicular, AP2M1 impacta vias como a sinalização por receptores tirosina-quinase, a dessensibilização de GPCRs e o ciclo de vesículas sinápticas. A desregulação da endocitose dependente de AP-2 está ligada a fenótipos alterados de sinalização e tráfego, relevantes para a neurobiologia, a dinâmica de receptores em células cancerosas e outros mecanismos de doença associados a estresse endocítico.

AP-2μ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AP2M1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AP-2μ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AP2M1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AP2M1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AP-2μ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AP2M1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AP-2μ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AP-2μ1 em células tumorais com expressão de AP2M1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.