AP-2γ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400884-ACT

TFAP2C codifica il fattore di trascrizione umano AP-2γ (TFAP2C), una proteina che si lega al DNA in modo sequenza-specifico e che regola programmi di espressione genica coinvolti nella differenziazione epiteliale, nella proliferazione e nella determinazione del destino di linea. AP-2γ integra segnali provenienti da vie di sviluppo e da pathway responsivi agli ormoni e modula reti trascrizionali implicate nella progressione del ciclo cellulare, nell’apoptosi e nella regolazione dello stato della cromatina. Un’attività deregolata di TFAP2C è stata associata ad alterazioni dell’identità epiteliale, dell’invasività e della riprogrammazione trascrizionale in molteplici contesti tumorali, rendendolo un nodo utile per studiare i circuiti trascrizionali oncogenici. Inoltre, TFAP2C contribuisce alla biologia della placenta e dell’epitelio mammario, offrendo un quadro di riferimento per analizzare l’uso di enhancer specifici di tessuto e la cooperatività tra fattori di trascrizione.

AP-2γ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TFAP2C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

AP-2γ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TFAP2C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TFAP2C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di AP-2γ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TFAP2C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da AP-2γ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via AP-2γ nelle cellule tumorali con espressione di TFAP2C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.