Plásmido Doble Nickase (h) Annexin VI: sc-401791-NIC

El gen humano **ANXA6** codifica la **anexina VI**, una proteína de andamiaje dependiente de Ca2+ que se une a fosfolípidos y se asocia con la cara interna de las membranas celulares para coordinar el tráfico de membranas, la exocitosis/endocitosis y la dinámica del citoesqueleto. La anexina VI participa en la señalización por calcio y en la organización de microdominios de membrana, influyendo en el recambio de receptores y en vías de transducción de señales que dependen del transporte vesicular regulado. Se la ha vinculado a procesos como la homeostasis del colesterol y la migración celular a través de sus funciones en la clasificación endosomal y el acoplamiento membrana–citoesqueleto. Se han descrito alteraciones en la expresión o localización de ANXA6 en contextos que incluyen la biología del cáncer y fenotipos celulares relacionados con el sistema cardiovascular, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de redes de señalización dependientes de membrana.

Annexin VI El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ANXA6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ANXA6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ANXA6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ANXA6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.