Androgen Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419181-ACT

O gene **Ar** do camundongo codifica o **receptor de andrógeno**, um fator de transcrição nuclear ativado por ligante que se liga a andrógenos e regula programas de expressão gênica que controlam o desenvolvimento reprodutivo, a diferenciação sexual e o metabolismo anabólico. Após a ativação, o receptor de andrógeno transloca-se para o núcleo, liga-se a elementos de resposta a andrógenos e integra-se a complexos de remodelamento de cromatina e de co-reguladores para modular redes transcricionais que governam a proliferação celular, a diferenciação e a homeostase tecidual. A sinalização por AR interage com as vias PI3K/AKT, MAPK e Wnt/β-catenina, moldando mecanismos de retroalimentação sobre a esteroidogênese e respostas a fatores de crescimento em múltiplos órgãos. A atividade desregulada de AR está implicada em fenótipos endócrinos e reprodutivos e fornece um elo mecanístico com a patobiologia dependente de hormônios, tornando **Ar** um nó central para estudar o controle transcricional por receptores nucleares *in vivo* e em modelos celulares.

Androgen Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ar sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Androgen Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ar em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ar, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Androgen Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ar nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Androgen Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Androgen Receptor em células tumorais com expressão de Ar silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.