Androgen Receptor Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400026-ACT

AR codifica il recettore umano degli androgeni, un recettore nucleare per ormoni steroidei attivato dal ligando che lega gli androgeni, trasloca nel nucleo e regola la trascrizione tramite gli elementi di risposta agli androgeni. La segnalazione del recettore degli androgeni coordina la progressione del ciclo cellulare, i programmi di differenziamento, il metabolismo e il rimodellamento della cromatina attraverso interazioni con co-regolatori e crosstalk con le vie PI3K/AKT, MAPK e WNT. Un’attività di AR deregolata è associata a una biologia guidata dal sistema endocrino ed è frequentemente studiata nei tumori ormono-responsivi, in fenotipi neuromuscolari come l’atrofia muscolare spinale e bulbare e nei disturbi del metabolismo degli steroidi. In quanto hub trascrizionale, AR fornisce un readout trattabile per studiare l’utilizzo degli enhancer, lo stato epigenetico e le reti geniche dipendenti dallo stimolo.

Androgen Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Androgen Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Androgen Receptor. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Androgen Receptor nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Androgen Receptor nelle cellule tumorali con espressione di AR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.