AMPKγ2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-404970-LAC

PRKAG2 codifica a subunidade regulatória γ2 da proteína quinase ativada por AMP (AMPK), um sensor central de energia heterotrimérico que relaciona as razões celulares AMP/ADP:ATP à reprogramação metabólica. A AMPKγ2 regula a ligação de nucleotídeos e o controlo alostérico do complexo catalítico, influenciando vias a jusante que coordenam a captação de glicose, a oxidação de ácidos gordos, a homeostase mitocondrial e a supressão de programas anabólicos através de nós como o mTORC1 e a autofagia. Em tecidos humanos, o PRKAG2 é altamente relevante para a fisiologia com elevada exigência energética e tem sido associado ao armazenamento de glicogénio cardíaco e a anomalias de condução, o que sustenta a sua utilização em estudos mecanísticos do acoplamento metabólico e eletrofisiológico. A perturbação da atividade da AMPKγ2 também contribui para modelos de adaptação ao stress, sinalização de nutrientes e controlo de qualidade de organelos em diversos tipos celulares.

As Partículas de Ativação Lentivirais AMPKγ2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PRKAG2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais AMPKγ2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PRKAG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de AMPKγ2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PRKAG2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.