ALR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419093

概要

マウスのGferは、肝再生促進因子（ALR）をコードしている。ALRはFAD依存性のスルフヒドリルオキシダーゼであり、ミトコンドリア膜間腔におけるMIA40/CHCHD4経路を介して、ミトコンドリアタンパク質の輸送および酸化的フォールディングを支える。ジスルフィド結合形成とレドックス恒常性を調節することで、ALRはミトコンドリアの完全性、細胞のエネルギー代謝、ならびに酸化ストレスへの抵抗性に寄与する。ALR活性の変化は、ミトコンドリア機能障害や肝細胞性・代謝性の表現型と関連づけられており、その下流ではアポトーシス、炎症、組織恒常性にも影響が及ぶ。これらの機能により、Gferは哺乳類細胞におけるレドックス制御シグナル伝達およびミトコンドリア品質管理を解析する上で重要な標的となる。

ALR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGfer遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gfer内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gferのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ALRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ALRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gfer欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ALRの機能に不可欠なGferエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gferゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ALR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびALR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gfer遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ALR HDRプラスミド（m）および ALR HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGferホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGfer標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。