alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419236-ACT

Atp1a1 codifica a subunidade catalítica alfa 1 da Na⁺/K⁺-ATPase, uma ATPase do tipo P localizada na membrana plasmática que mantém os gradientes de sódio e potássio essenciais para o potencial de membrana, a homeostase osmótica e o transporte ativo secundário. Ao regular o equilíbrio iónico, a ATP1A1 influencia processos como a excitabilidade neuronal, o transporte epitelial, o controlo do volume celular e o acoplamento metabólico ao consumo de ATP. A atividade da Na⁺/K⁺-ATPase também participa na transdução de sinais ao organizar microdomínios da membrana e ao modular vias associadas ao manuseamento de cálcio e às respostas ao stress. A desregulação da função da ATP1A1 tem sido associada a fenótipos de excitabilidade e de transporte alterados, tornando-a relevante para estudos da função neurológica, dos epitélios renal e das vias aéreas, e das respostas celulares ao stress iónico em modelos murinos.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Atp1a1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Atp1a1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Atp1a1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Atp1a1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 em células tumorais com expressão de Atp1a1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.