ALP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401877

概要

PDLIM3は、横紋筋で高発現しZディスクに局在するPDZ-LIMファミリーのアダプタータンパク質であるALP（actinin-associated LIM protein）をコードしており、α-アクチニンを基盤とするアクチンフィラメントをシグナル伝達複合体へと結び付けます。ALPはPDZドメインおよびLIMドメインを介して、アクチン動態やストレス応答性経路を協調させるタンパク質間相互作用の足場（スキャフォールド）として機能し、サルコメア形成、メカノトランスダクション、細胞骨格の組織化を支えます。PDLIM3の発現異常やZディスクの完全性の破綻は筋原線維構築の障害と関連し、心筋症や骨格筋機能障害の文脈で研究されています。筋構造の恒常性を示す指標として、ALPは、細胞骨格スキャフォールドが収縮機能、細胞接着、ストレスシグナル伝達をどのように調節するかを検討するうえで重要です。

ALP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPDLIM3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PDLIM3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PDLIM3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ALPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ALPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PDLIM3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ALPの機能に不可欠なPDLIM3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PDLIM3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ALP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびALP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PDLIM3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ALP HDRプラスミド（h）および ALP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPDLIM3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPDLIM3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。