Aldose Reductase Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401437-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Aldose ReductaseO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Aldose Reductase (h) e o Plasmídeo Double Nickase Aldose Reductase (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para AKR1B1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Aldose Reductase Anticorpo (H-6): sc-166918
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Aldose Reductase Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401437-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aldose Reductase Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401437-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKR1B1 codifica a aldose redutase humana, uma aldo-ceto redutase dependente de NADPH que catalisa a redução da glicose a sorbitol como a primeira etapa da via dos polióis. Ao consumir NADPH e promover o acúmulo de sorbitol, a aldose redutase pode influenciar o equilíbrio redox celular, as respostas ao estresse osmótico e o metabolismo subsequente da frutose, interligando-se a processos de estresse oxidativo e de desintoxicação de carbonilas. A atividade de AKR1B1 é frequentemente estudada no contexto de estresse metabólico associado à hiperglicemia, sinalização relacionada à inflamação e suscetibilidade tecidual ao dano oxidativo. Em modelos experimentais, a desregulação do fluxo pela via dos polióis e alterações no processamento de aldeídos foram associadas a mecanismos subjacentes às complicações do diabetes e a fenótipos mais amplos de doenças metabólicas.
Aldose Reductase O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AKR1B1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AKR1B1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AKR1B1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AKR1B1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.