Aldolase B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402714-ACT

ALDOB codifica a aldolase B humana, uma enzima glicolítica e frutolítica que catalisa a clivagem de frutose-1,6-bisfosfato e frutose-1-fosfato, sustentando a utilização de carboidratos e o metabolismo energético. A atividade da aldolase B é central no processamento hepático da frutose e integra-se com a glicólise, a gliconeogênese e o controle mais amplo do fluxo de carbono. Alterações na expressão ou na função de ALDOB estão ligadas a erros inatos do metabolismo da frutose e têm sido associadas à desregulação metabólica que afeta a fisiologia hepática. Como um nó metabólico, ALDOB é frequentemente avaliado em estudos de sensoriamento de nutrientes, diferenciação de hepatócitos e reprogramação de vias em modelos celulares relevantes para doenças.

Aldolase B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ALDOB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Aldolase B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ALDOB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ALDOB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Aldolase B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ALDOB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Aldolase B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Aldolase B em células tumorais com expressão de ALDOB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.