Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406326

Panoramica

ALDH8A1 umano codifica l’aldeide deidrogenasi 8-A1, un enzima NAD(P)+-dipendente che ossida aldeidi reattive nei corrispondenti acidi, contribuendo alla detossificazione cellulare delle aldeidi e all’omeostasi redox. L’attività di ALDH8A1 interseca vie metaboliche coinvolte nella gestione delle aldeidi derivate dalla perossidazione lipidica e risposte più ampie allo stress da carbonili, aiutando a limitare la formazione di addotti proteici e del DNA mediata dalle aldeidi. La disregolazione degli enzimi della famiglia delle aldeide deidrogenasi è associata a una tolleranza alterata allo stress ossidativo, a una riprogrammazione metabolica e a una maggiore vulnerabilità al danno da elettrofili in molteplici contesti patologici. Nella ricerca biomedica, ALDH8A1 viene studiato per il suo impatto sul metabolismo mitocondriale e citosolico, sulla segnalazione dello stress e sulla fitness cellulare in condizioni che aumentano il carico endogeno di aldeidi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ALDH8A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ALDH8A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ALDH8A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ALDH8A1 per lo studio della segnalazione di Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ALDH8A1 critici per la funzione di Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ALDH8A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ALDH8A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ALDH8A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ALDH8A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.