Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400782-ACT

L’ALDH1A1 umano codifica l’aldeide deidrogenasi citosolica 1-A1, un enzima NAD(P)+-dipendente che ossida aldeidi alifatiche e aromatiche reattive nei corrispondenti acidi carbossilici, contribuendo alla detossificazione cellulare e all’omeostasi redox. ALDH1A1 è un componente chiave del metabolismo dei retinoidi tramite la conversione del retinaldeide in acido retinoico, collegandolo a programmi trascrizionali che controllano la differenziazione, il mantenimento dell’epitelio e l’adattamento metabolico. Limitando i danni da aldeidi derivate dalla perossidazione lipidica e modulando la segnalazione dell’acido retinoico, ALDH1A1 influenza le risposte allo stress ossidativo e le vie di processamento degli xenobiotici. Un’espressione deregolata di ALDH1A1 è stata associata a stati di differenziazione alterati, riprogrammazione metabolica e fenotipi di tolleranza allo stress in diversi modelli cellulari rilevanti per le malattie.

Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ALDH1A1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ALDH1A1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ALDH1A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ALDH1A1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 nelle cellule tumorali con espressione di ALDH1A1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.